Hybrid-R血液RNA是一套完整的試劑盒,配有一種隨時(shí)可用的試劑,可用于從高達(dá)0.25毫升的全血樣品中分離總RNA。該試劑盒利用了ribo ex LS強(qiáng)大的細(xì)胞裂解能力和基于玻璃纖維膜技術(shù)的純化方法。Hybrid-R血液RNA快速便捷的程序只需30分鐘即可完成純RNA的制備。全血樣品在ribo ex LS中均質(zhì)化并溶解,ribo ex LS是一種含有苯酚和胍鹽的單相溶液,可快速溶解細(xì)胞并使核酸酶失活。在常規(guī)方法中,不含細(xì)胞核(因此也不含RNA)的哺乳動(dòng)物血液的紅細(xì)胞應(yīng)通過(guò)預(yù)處理如滲透裂解從全血中分離白細(xì)胞來(lái)去除。這些額外的處理增加了實(shí)驗(yàn)時(shí)間和RNA斷裂的可能性,隨后RNA質(zhì)量下降。Hybrid-R血液RNA制備不需要額外處理血樣,全血在ribo ex LS中只需一步即可溶解。氯仿的加入使溶胞產(chǎn)物分離成水相和有機(jī)相。相分離后,DNA和蛋白質(zhì)分別保留在相間和有機(jī)相中,但釋放的RNA存在于水相中。提取水相,并應(yīng)用于EzPure,以消除少量被污染的DNA和其他血液污染物。將流過(guò)的溶液與緩沖液RB1(RNA結(jié)合緩沖液)混合,然后將混合物加到微型旋轉(zhuǎn)柱上。在用緩沖液RBW和RNW進(jìn)行一系列洗滌后,純RNA可以用不含RNA酶的水洗脫。Hybrid-R血液RNA適用于0.1mL至0.25mL哺乳動(dòng)物全血的RNA制備。典型產(chǎn)量為每0.25毫升全血3微克。純化的RNA可用于Poly A+ RNA的分離、Northern印跡、點(diǎn)印跡、體外翻譯、克隆、RT-PCR、RPA和其他分析程序。