谷丙轉(zhuǎn)氨酶/丙氨酸氨基轉(zhuǎn)氨酶（GPT/ALT)測試盒

微量法 100管/48樣

正式測定前務(wù)必取2-3個預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定

測定意義

GPT（EC 2.6.1.2）廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細胞中，催化氨基酸和酮酸轉(zhuǎn)氨基反應(yīng)，在氨基酸代謝中具有重要作用。此外，哺乳動物肝細胞GPT活性很高，當肝細胞壞死，GPT釋放到血液中，血清GPT活性顯著增高。因此，GPT被世界衛(wèi)生組織推薦為肝功能損害最敏感的檢測指標。

測定原理

GPT催化丙氨酸和α-酮戊二酸發(fā)生轉(zhuǎn)氨基反應(yīng)，生成丙酮酸和谷氨酸；加入2,4-二硝*苯肼溶液，不僅終止上述反應(yīng)，而且與酮酸中的羰基加成，生成丙酮酸苯腙；苯腙在堿性條件下呈紅棕色，可以在505nm讀取吸光值并計算酶活力。

試驗中所需的儀器和用品

可見分光光度計/酶標儀、水浴鍋、臺式離心機、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。

試劑的組成和配制

提取液：60mL×1瓶，4℃保存。

試劑一：液體2.5 mL×1瓶， 4℃保存； 

試劑二：液體2.5 mL×1瓶， 4℃保存；

試劑三：液體25 mL×1瓶，4℃保存；

樣品測定的準備

1、細菌、細胞或組織樣品的制備：

細菌或培養(yǎng)細胞：先收集細菌或細胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照細菌或細胞數(shù)量（104個）：提取液體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬細菌或細胞加入1mL提取液），超聲波破碎細菌或細胞（冰浴，功率20％或200W，超聲3s，間隔10s，重復(fù)30次）；8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。

組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL提取液），進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。

2、血清（漿）樣品：直接檢測。

測定步驟

1. 分光光度計或酶標儀預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長至505nm，蒸餾水調(diào)零。

2. 在EP管或在96孔板中加入下列試劑

混勻后，37℃（哺乳動物）或25℃（其它物種）準確反應(yīng)20min

混勻后，37℃（哺乳動物）或25℃（其它物種）準確反應(yīng)20min

混勻，室溫（25℃）放置10min，在505nm波長處測各管吸光度A。ΔA=A測定管-A對照管。每個測定管需設(shè)一個對照管。

計算

a.用微量石英比色皿測定的計算公式如下

1、標準條件下測定的回歸曲線， y = 0.4228x+0.0003   (x為標準品濃度，umol/mL；y為ΔA)。

2、血清（漿）GPT活力的計算

單位的定義：每mL血清（漿）每分鐘催化產(chǎn)生1nmol丙酮酸定義為一個酶活力單位。

GPT（nmol/min/mL）=（ΔA-0.0003）÷0.4228÷T×103=118.26×（ΔA-0.0003）

3、細胞、細菌和組織中GPT活力的計算

（1）按樣本蛋白濃度計算：

單位的定義：每mg組織蛋白每分鐘催化產(chǎn)生1 nmol丙酮酸定義為一個酶活力單位。

GPT（nmol/min/mg prot）=[（ΔA-0.0003）÷0.4228×V1]÷(V1×Cpr)÷T×103 =118.26×（ΔA-0.0003）÷Cpr

需要另外測定，建議使用本公司BCA蛋白質(zhì)含量測定試劑盒。

（2） 按樣本鮮重計算：

單位的定義：每g組織每分鐘催化產(chǎn)生1nmol丙酮酸定義為一個酶活力單位。

GPT（nmol/min/g鮮重）=[（ΔA-0.0003）÷0.4228×V1]÷(W×V1÷V2)÷T×103 =118.26×（ΔA-0.0003）÷W

（3）按細菌或細胞密度計算：

單位的定義：每1萬個細菌或細胞每分鐘催化產(chǎn)生1nmol丙酮酸定義為一個酶活力單位。

GPT（nmol/min/104 cell）=[（ΔA-0.0003）÷0.4228×V1]÷(500×V1÷V2)÷T×103 =0.236×（ΔA-0.0003）

V1：加入反應(yīng)體系中樣本體積，0.01mL；V2：加入提取液體積，1 mL；T：反應(yīng)時間，20min；Cpr：蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣本質(zhì)量，g；500：細胞或細菌總數(shù)，500萬；103：1umol/mL=103 nmol/mL。

b.使用96孔板測定的計算公式如下：

1、標準條件下測定的回歸曲線， y = 0.2114x+0.0003   (x為標準品濃度，umol/mL；y為ΔA)。

2、血清（漿）GPT活力的計算

單位的定義：每mL血清（漿）每分鐘催化產(chǎn)生1nmol丙酮酸定義為一個酶活力單位。

GPT（nmol/min/mL）=（ΔA-0.0003）÷0.2114÷T×103=236.5×（ΔA-0.0003）

3、細胞、細菌和組織中GPT活力的計算

（1）按樣本蛋白濃度計算：

單位的定義：每mg組織蛋白每分鐘催化產(chǎn)生1 nmol丙酮酸定義為一個酶活力單位。

GPT（nmol/min/mg prot）=[（ΔA-0.0003）÷0.2114×V1]÷(V1×Cpr)÷T×103 =236.5×（ΔA-0.0003）÷Cpr

需要另外測定，建議使用本公司BCA蛋白質(zhì)含量測定試劑盒。

（2） 按樣本鮮重計算：

單位的定義：每g組織每分鐘催化產(chǎn)生1nmol丙酮酸定義為一個酶活力單位。

GPT（nmol/min/g鮮重）=[（ΔA-0.0003）÷0.2114×V1]÷(W×V1÷V2)÷T×103 =236.5×（ΔA-0.0003）÷W

（3）按細菌或細胞密度計算：

單位的定義：每1萬個細菌或細胞每分鐘催化產(chǎn)生1nmol丙酮酸定義為一個酶活力單位。

GPT（nmol/min/104 cell）=[（ΔA-0.0003）÷0.2114×V1]÷(500×V1÷V2)÷T×103 =0.473×（ΔA-0.0003）

V1：加入反應(yīng)體系中樣本體積，0.01mL；V2：加入提取液體積，1 mL；T：反應(yīng)時間，20 min；Cpr：蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣本質(zhì)量，g；500：細胞或細菌總數(shù)，500萬；103：1umol/mL=103 nmol/mL。

1. 標準曲線線性范圍為：0.01 umol/mL -2 umol/mL。

2. ΔA線性范圍為：0.01 -1。

上海牧榮生物科技有限公司

1. 國內(nèi)試劑耗材經(jīng)銷代理。

2. 國外試劑的訂購。可提供歐美實驗室品牌的采購方案。

3. 提供加急物流處理，進口貨物，最快交期1-2周。

4. 進出口貨物代理服務(wù)。

5. 公司代理眾多有名生命科學領(lǐng)域的研究試劑、儀器和實驗室消耗品品牌：CELL DATA,Alamanda Polymers， cstti，Click Chemistry tools，Nanoprobes，Ancell，NANOCS，Ambeed, Inc，SPEED BioSystems, LLC，Tulip Biolabs, Inc，Torrey Pines Biolabs，magsphere ,FabGennix International ,paratechs，Medicago,Oraflow,CWE,Wasatch Photonics, alphananote, It4ip, proteoform, Caprico等,重點合作品牌 Lee Biosolutions,chematech,Nanopartz,denovix,Atto tec,macrocyclics等。

6. 質(zhì)量保證，所有產(chǎn)品都提供售后服務(wù)。付款方式靈活。公司堅持“一站式"服務(wù)模式，為客戶全面解決實驗、生產(chǎn)、開發(fā)需求。公司整合國際與國內(nèi)資源，加強網(wǎng)絡(luò)建設(shè)，提高公司內(nèi)部運作效率，為客戶提供方便、快捷的服務(wù)。

7. 公司突出創(chuàng)新思維，提高工作效能，減低運作成本，為客戶提供優(yōu)惠的價格。

谷丙轉(zhuǎn)氨酶/丙氨酸氨基轉(zhuǎn)氨酶（GPT/ALT)測試盒