總抗氧化能力（FRAP法）測(cè)試盒

微量法100T/96S

注意：正式測(cè)定之前選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測(cè)定。

研究意義：

測(cè)定對(duì)象中各種抗氧化物質(zhì)和抗氧化酶等構(gòu)成總抗氧化水平。在生物學(xué)、醫(yī)學(xué)和藥學(xué)研究中常常檢測(cè)血漿、血清、唾液、尿液等各種體液，細(xì)胞或組織等裂解液、植物或中草藥抽提液及各種抗氧化物(antioxidant)溶液的總抗氧化能力。

測(cè)定原理：

在酸性環(huán)境下，還原Fe3+-三吡啶三吖嗪(Fe3+-TPTZ)產(chǎn)生藍(lán)色的Fe2+-TPTZ的能力反映了總抗氧化能力。

自備實(shí)驗(yàn)用品：

恒溫水浴鍋、低溫離心機(jī)、可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96孔板和蒸餾水。

試劑組成和配制：

提取液：液體100mL×1瓶，使用前預(yù)冷。

試劑一：液體15mL×1瓶，避光保存。

試劑二：液體1.5mL×1瓶，4℃避光保存。

試劑三：液體1.5mL×1瓶，避光保存。

混合液(現(xiàn)配現(xiàn)用)：將試劑一、試劑二、試劑三按10:1:1的比例混合，使用前37℃預(yù)溫。

樣品的制備：

(1) 血清、血漿、唾液或尿液等液體樣品

血漿（制備時(shí)可以使用肝素或檸檬酸鈉抗凝，不宜使用EDTA抗凝）4℃，5000rpm 離心10min，取上清待測(cè)。血清、唾液或尿液樣品直接用于測(cè)定，也可以-80℃凍存（不宜超過(guò)30 d）后再測(cè)定。

(2) 組織樣品

按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱(chēng)取約0.1g組織，加入1mL提取液）進(jìn)行冰浴勻漿，然后10000g，4℃離心10min，取上清，置冰上待測(cè)。

(3) 細(xì)胞樣品

按照細(xì)胞數(shù)量（104個(gè)）：提取液體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬(wàn)細(xì)胞加入1mL提取液），冰浴超聲波破碎（功率200W，超聲3s，間隔10s，重復(fù)30次）；10000g，4℃離心10min，取上清，置冰上待測(cè)。

操作步驟：

1. 分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱30min，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至593nm，蒸餾水調(diào)零。

2. 操作表

注意：空白管只需測(cè)定一次。

總抗氧化能力計(jì)算公式：

1. 用微量石英比色皿測(cè)定的計(jì)算公式如下

標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)：y=0.8442x-0.0048，R2=0.9979

1. 按樣本質(zhì)量計(jì)算

單位定義：每g樣本每分鐘產(chǎn)生1μmolFe2+-TPTZ定義為一個(gè)酶活力單位。

總抗氧化能力（U/g 鮮重）=（△A+0.0048）÷ 0.8442×1000×V樣÷(V樣÷V樣總×W)÷T

                        =59.228×（△A+0.0048）÷W

2. 按樣本蛋白濃度計(jì)算

單位定義：每mg蛋白每分鐘產(chǎn)生1μmolFe2+-TPTZ定義為一個(gè)酶活力單位。

總抗氧化能力（U/mg prot）=（△A+0.0048）÷0.8442×1000×V樣÷(V樣÷V樣總×Cpr)÷T

                        =59.228×（△A+0.0048）÷Cpr

3. 按細(xì)胞計(jì)算

單位定義：每萬(wàn)個(gè)細(xì)胞每分鐘產(chǎn)生1μmolFe2+-TPTZ定義為一個(gè)酶活力單位。

總抗氧化能力（U/104cell）=（△A+0.0048）÷0.8442×1000×V樣÷（V樣÷V樣總×細(xì)胞數(shù)量（萬(wàn)個(gè)））÷T

= 59.228×（△A+0.0048）÷ 細(xì)胞數(shù)量（萬(wàn)個(gè)）

4. 按液體體積計(jì)算

單位定義：每毫升樣本每分鐘產(chǎn)生1μmolFe2+-TPTZ定義為一個(gè)酶活力單位。

總抗氧化能力（U/mL）=（△A+0.0048）÷0.8442×1000÷T

= 59.228×（△A+0.0048）

V樣總：加入提取液體積，1 mL；V樣：反應(yīng)中樣品體積，6μL；T：反應(yīng)時(shí)間，20min；W：樣品質(zhì)量，g；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/mL

b.用96孔板測(cè)定的計(jì)算公式如下

標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)：y = 0.4221x - 0.0048；R2=0.9979

1. 按樣本質(zhì)量計(jì)算

單位定義：每g樣本每分鐘產(chǎn)生1μmolFe2+-TPTZ定義為一個(gè)酶活力單位。

總抗氧化能力（U/g 鮮重）=（△A+0.0048）÷0.4221×1000×V樣÷(V樣÷V樣總×W)÷T

                        =118.455×（△A+0.0048）÷W

2. 按樣本蛋白濃度計(jì)算

單位定義：每mg蛋白每分鐘產(chǎn)生1μmolFe2+-TPTZ定義為一個(gè)酶活力單位。

總抗氧化能力（U/mg prot）=（△A+0.0048）÷0.4221×1000×V樣÷(V樣÷V樣總×Cpr)÷T

                        =118.455×（△A+0.0048）÷Cpr

3. 按細(xì)胞計(jì)算

單位定義：每萬(wàn)個(gè)細(xì)胞每分鐘產(chǎn)生1μmolFe2+-TPTZ定義為一個(gè)酶活力單位。

總抗氧化能力（U/104cell）=（△A+0.0048）÷0.4221×1000×V樣÷（V樣÷V樣總×細(xì)胞數(shù)量（萬(wàn)個(gè)））÷T

= 118.455×（△A+0.0048）÷ 細(xì)胞數(shù)量（萬(wàn)個(gè)）

3. 按液體體積計(jì)算

單位定義：每毫升樣本每分鐘產(chǎn)生1μmolFe2+-TPTZ定義為一個(gè)酶活力單位。

總抗氧化能力（U/mL）=（△A+0.0048）÷0.4221×1000÷T

= 118.455×（△A+0.0048）

V樣總：加入提取液體積，1 mL；V樣：反應(yīng)中樣品體積，6μL；T：反應(yīng)時(shí)間，20min；W：樣品質(zhì)量，g；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/mL

注意事項(xiàng)：

1. 試劑二對(duì)人體有刺激性，請(qǐng)采取適當(dāng)?shù)姆雷o(hù)措施。為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴乳膠手套操作。

2. 盡量避免使用在酸性條件下呈藍(lán)色或接近藍(lán)色的試劑，否則對(duì)本試劑盒的檢測(cè)結(jié)果產(chǎn)生干擾。

3. 樣品中不宜添加Tween、Triton和NP-40等去垢劑和DTT、巰基乙醇等影響氧化還原反應(yīng)的還原劑。

上海牧榮生物科技有限公司

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