尿酸(UA)含量測試盒

 微量法100T/96S

注意：正式測定之前選擇2-3個預期差異大的樣本做預測定。

測定意義：

UA是鳥類和爬行類動物的主要代謝產物，正常人體尿液中產物主要為尿素，含少量尿酸。此外，UA還是重要的抗氧化劑，能清除超氧化物，羥自由基等。體內UA生成量和排泄量不平衡會導致多種疾病的發(fā)生。例如，血中UA升高會引起痛風、腎功能損害和動脈硬化，相反UA降低會引起惡性貧血，在臨床診斷上具有重要的意義。

測定原理：

尿酸酶能催化UA生成尿囊素，CO2及H2O2，H2O2 氧化亞鐵氰*鉀中的Fe2+ 生成Fe3+ ，Fe3+進一步與酚和4-氨基安替比林縮合生成紅色醌類化合物，在505nm下有特征吸收峰，測定反應體系505nm的吸收值，可計算尿酸的含量。

自備實驗用品及儀器：

恒溫水浴鍋、可見分光光度計/酶標儀、微量石英比色皿/96孔板和蒸餾水。

試劑組成和配制：

緩沖液：液體20mL×1瓶，4℃保存。

試劑一：

A：用于標準管和測定管，粉劑1瓶，4℃避光保存，使用前加13mL緩沖液溶解。

B：用于空白管，粉劑1瓶，4℃避光保存，使用前加7 mL緩沖液溶解。

試劑二：粉劑1管，4℃避光保存，使用前加2mL蒸餾水溶解，60℃加熱溶解。

樣品的制備：

1. 動植物組織：建議稱取約0.1g組織，加入1mL生理鹽水或蒸餾水，進行冰浴勻漿，然后8000g，4℃離心10min，取上清，置冰上待測。

2. 血清，培養(yǎng)液：直接檢測。

測定操作表：

1. 分光光度計或酶標儀預熱30min以上，調節(jié)波長至505nm。

2. 操作表

UV含量計算公式：

1. 組織：

（1）按樣本重量計算

尿酸含量（μmol/g 鮮重）=C標準品×（A測定管－A空白管）÷（A標準管－A空白管）÷ （W÷V樣總）=0.5×（A測定管－A空白管）÷（A標準管－A空白管）÷ W

（2）按樣本蛋白濃度計算

尿酸含量（μmol/mg prot）=C標準品×（A測定管－A空白管）÷（A標準管－A空白管）÷ Cpr =0.5×（A測定管－A空白管）÷（A標準管－A空白管）÷Cpr

尿酸（μmol/L）= C標準品×（A測定管－A空白管）÷（A標準管－A空白管）×103

=500×（A測定管－A空白管）÷（A標準管－A空白管）

C標：標準品濃度0.5μmol/mL；V樣總：加入提取液體積，1mL；W：樣品質量，g ；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/mL；103 ：1μmol/ L=103μmol/ mL

注意事項：

1. 血清樣本請在24小時內測定，或者4℃密封避光保存不超過72小時。

2. 吸光值大于0.8可用蒸餾水稀釋樣本，并在計算公式中算入稀釋倍數。

3. *低檢出限為10μmol/L。

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