簡要描述:PolyShooter NEO-PEI DNA 轉(zhuǎn)染試劑,產(chǎn)品編碼:P09310-500。它有三種規(guī)格:500ML、100ML、1ML。是一種功能強(qiáng)大、值得信賴且經(jīng)濟(jì)實惠的瞬時轉(zhuǎn)染試劑,廣泛適用于多種細(xì)胞系。同時,在大規(guī)模重組蛋白表達(dá)和病毒生產(chǎn)等領(lǐng)域有著高效、低毒、穩(wěn)定、可靠等顯著優(yōu)勢。
詳細(xì)介紹
品牌 | 其他品牌 | 供貨周期 | 一個月 |
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應(yīng)用領(lǐng)域 | 醫(yī)療衛(wèi)生,環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),綜合 |
PolyShooter NEO-PEI DNA 轉(zhuǎn)染試劑,產(chǎn)品編碼:P09310-500。
PolyShooter NEO-PEI DNA 轉(zhuǎn)染試劑
PolyShooterTM
NEO-PEI Transfection Reagent
DNA transfection reagent for large scale recombinant protein expression and virus production
Catalog Number:P09310
01/產(chǎn)品概述
PEI是基因轉(zhuǎn)染中常用的高分子載體,同時也是基因轉(zhuǎn)染的“金標(biāo)準(zhǔn)"。PEI轉(zhuǎn)染的原理是帶正電的陽離子聚合物與核酸中帶負(fù)電的磷酸基團(tuán)形成帶正電的復(fù)合物后,再與細(xì)胞表面帶負(fù)電的蛋白多糖相互作用,通過細(xì)胞胞吞進(jìn)入細(xì)胞。PEI主鏈上每三個原子就含有一個氮原子,因此具有較高的陽離子密度,這對于結(jié)合帶負(fù)電荷的核酸分子是非常有利的。在生理pH條件下,PEI部分胺基被質(zhì)子化,隨著體系pH值的降低,PEI剩余的胺基被質(zhì)子化,從而賦予了其出色的核酸結(jié)合能力和質(zhì)子緩沖能力,有利于通過質(zhì)子海綿效應(yīng)從內(nèi)涵體逃逸。但是,PEI高的陽離子電荷密度,導(dǎo)致其嚴(yán)重的細(xì)胞毒性。同時,PEI 25K含有4%-11%的殘留丙?;?,這可能阻礙聚合物主鏈與DNA的有效結(jié)合,影響基因轉(zhuǎn)染效率。因此,針對PEI的研究工作主要聚焦在通過功能化修飾以及脫丙?;瑏硖岣咿D(zhuǎn)染效率、降低細(xì)胞毒性。
LeapWal PolyShooter NEO-PEI DNA 轉(zhuǎn)染試劑是一種基于分子量25 kDa PEI的DNA轉(zhuǎn)染試劑。通過對PEI進(jìn)行功能改性,NEO-PEI 丙酰基*脫落,顯著改善了PEI的基因遞送性能,表現(xiàn)出較好的穩(wěn)定性和較低的細(xì)胞毒性。PolyShooter NEO-PEI與PEI 25000轉(zhuǎn)染試劑相比,具有很多優(yōu)點。包括:
1. PolyShooter NEO-PEI為即用型轉(zhuǎn)染試劑,無需配置,可直接用于細(xì)胞轉(zhuǎn)染實驗,而PEI 25000需要先把水調(diào)成弱酸性助其溶解,溶解后再用NaOH把pH調(diào)至中性,配置過程繁瑣復(fù)雜,容易引入誤差導(dǎo)致轉(zhuǎn)染效果不穩(wěn)定。PEI 40000雖然較PEI 25000更易溶解,但也同樣存在配置繁瑣,配置過程中容易引入誤差的風(fēng)險。
2. PEI 25000含有4%-11%的丙酰基殘留,丙?;鶗柚咕酆衔镏麈溑cDNA結(jié)合,影響轉(zhuǎn)染效果。相較于PEI 25000,PolyShooter NEO-PEI丙?;?脫落,因此其性能始終高效如一。
LeapWal PolyShooter NEO-PEI DNA 轉(zhuǎn)染試劑是一種功能強(qiáng)大、值得信賴且經(jīng)濟(jì)實惠的瞬時轉(zhuǎn)染試劑,廣泛適用于多種細(xì)胞系,包括HEK-293、HEK-293T、CHO-K1、COS-1、COS-7、NIH/3T3、Sf9、HepG2和HeLa細(xì)胞等。同時,PolyShooter NEO-PEI轉(zhuǎn)染試劑在大規(guī)模重組蛋白表達(dá)和病毒生產(chǎn)等領(lǐng)域有著高效、低毒、穩(wěn)定、可靠等顯著優(yōu)勢。PolyShooter NEO-PEI提供從96孔板到200L生物反應(yīng)器持續(xù)的高表達(dá)轉(zhuǎn)染體系,實現(xiàn)從新藥研發(fā)到工業(yè)化生產(chǎn)的輕松過度。與大多數(shù)細(xì)胞轉(zhuǎn)染方案相比,使用PolyShooter NEO-PEI既能得到穩(wěn)定的基因表達(dá)效率,又可顯著降低轉(zhuǎn)染成本。
02/產(chǎn)品組分
03/保存條件
冰袋(wet ice)運(yùn)輸。4℃保存,有效期6個月。-30℃至-10℃保存,有效期12個月,避免反復(fù)凍融。
04/產(chǎn)品特點
v 易于使用——即用型轉(zhuǎn)染試劑,無需配置,可直接用于細(xì)胞轉(zhuǎn)染實驗
v 轉(zhuǎn)染效率高——針對多種類型細(xì)胞,均表現(xiàn)出優(yōu)秀的轉(zhuǎn)染效率和高重組蛋白表達(dá)
v 細(xì)胞毒性低——作用溫和,能更好地實現(xiàn)高轉(zhuǎn)染效率與低細(xì)胞毒性之間的平衡
v 性能更穩(wěn)定——丙?;?脫落,性能始終高效如一
v 高性價比——既能得到穩(wěn)定的基因表達(dá)效率,又可顯著降低轉(zhuǎn)染成本
v 化學(xué)成分明確,不含動物來源成分
05/適用范圍
PolyShooter NEO-PEI Transfection Reagent廣泛適用于多種細(xì)胞系的DNA轉(zhuǎn)染,可應(yīng)用于大規(guī)模重組蛋白表達(dá)和病毒生產(chǎn)等領(lǐng)域。本試劑提供從96孔板到200L生物反應(yīng)器持續(xù)的高表達(dá)轉(zhuǎn)染體系,實現(xiàn)從新藥研發(fā)到工業(yè)化生產(chǎn)的輕松過度。
06/實驗流程概要
圖1: PolyShooter NEO-PEI Transfection Reagent轉(zhuǎn)染實驗流程圖
07/實驗步驟(以24孔板為例,其他培養(yǎng)板加樣體積參考表一:轉(zhuǎn)染量度標(biāo)準(zhǔn))
1: 準(zhǔn)備待轉(zhuǎn)染細(xì)胞
貼壁細(xì)胞:轉(zhuǎn)染前一天,將消化后的細(xì)胞按照每孔0.3-2x105個細(xì)胞的量進(jìn)行鋪板,使其在轉(zhuǎn)染時密度為60%-70%。
懸浮細(xì)胞:轉(zhuǎn)染當(dāng)天,配制轉(zhuǎn)染試劑-核酸復(fù)合物之前,在24孔板中進(jìn)行細(xì)胞鋪板,每500 µL生長培養(yǎng)基中加入2-5x105個細(xì)胞。
? 細(xì)胞狀態(tài)會極大影響轉(zhuǎn)染效率,待轉(zhuǎn)染細(xì)胞應(yīng)處于良好生長狀態(tài),建議使用生長處于指數(shù)期、存活率大于90% 的細(xì)胞進(jìn)行轉(zhuǎn)染。
2: 準(zhǔn)備PolyShooter NEO-PEI轉(zhuǎn)染試劑-核酸復(fù)合物
(1)取1 μg質(zhì)粒加入到1.5 mL離心管中,加入2.5 μL* PolyShooter NEO-PEI轉(zhuǎn)染試劑與質(zhì)?;旌?,室溫孵育3分鐘。
? * PolyShooter NEO-PEI轉(zhuǎn)染試劑使用量受細(xì)胞類型及其他實驗條件影響,通常情況下,DNA(μg)和PolyShooter NEO-PEI轉(zhuǎn)染試劑(μL)的推薦使用比例為1:2.5。建議初次使用時,可在1:1-1:5的范圍內(nèi)調(diào)整以優(yōu)化轉(zhuǎn)染效果。
(2)往上述混合物中加入100 μL無血清基礎(chǔ)培養(yǎng)基1(與培養(yǎng)體系一致,且無血清無雙抗),輕輕混勻,在室溫下靜置30分鐘,形成轉(zhuǎn)染試劑-核酸復(fù)合物。
? PolyShooter NEO-PEI轉(zhuǎn)染試劑-核酸復(fù)合物在室溫下4個小時內(nèi)保持穩(wěn)定。
(3)30分鐘后,往轉(zhuǎn)染試劑-核酸復(fù)合物中加入150 μL無血清基礎(chǔ)培養(yǎng)基2(與培養(yǎng)體系一致,且無血清無雙抗)稀釋復(fù)合物。
3: 細(xì)胞轉(zhuǎn)染
棄去細(xì)胞培養(yǎng)基,將上述250 µL轉(zhuǎn)染試劑-核酸復(fù)合物加入每孔細(xì)胞,轉(zhuǎn)染4-16小時后,給細(xì)胞補(bǔ)充新鮮生長培養(yǎng)基500 µL/孔。
4: 分析轉(zhuǎn)染細(xì)胞
轉(zhuǎn)染細(xì)胞培養(yǎng)36-48小時后,可根據(jù)實際情況用熒光檢測法、Western Blot、RT-PCR、ELISA、流式細(xì)胞術(shù)、報告基因等檢測轉(zhuǎn)染效果,或加入篩選藥物進(jìn)行穩(wěn)定細(xì)胞株的篩選。
表一:轉(zhuǎn)染量度標(biāo)準(zhǔn)
08/注意事項
1: 核酸質(zhì)量:想要獲得最高的轉(zhuǎn)染效率和更低的細(xì)胞毒性,應(yīng)選用高純度、無菌、無污染、無內(nèi)毒素的優(yōu)質(zhì)核酸。質(zhì)粒中的內(nèi)毒素是轉(zhuǎn)染的大敵,內(nèi)毒素會導(dǎo)致轉(zhuǎn)染效率顯著下降。推薦使用無內(nèi)毒素質(zhì)粒抽提試劑盒進(jìn)行質(zhì)粒提取,保證質(zhì)粒A260/A280比值為1.8-2.0。同時,需合理計算質(zhì)粒用量,轉(zhuǎn)染過量的質(zhì)??赡軙?dǎo)致細(xì)胞毒性甚至死亡;
2: 細(xì)胞質(zhì)量:細(xì)胞狀態(tài)會極大影響轉(zhuǎn)染效率,建議使用生長處于指數(shù)期、存活率大于90%的細(xì)胞進(jìn)行轉(zhuǎn)染;
3: 細(xì)胞密度:建議細(xì)胞傳代后12-24 h內(nèi)、細(xì)胞密度為60%-70% 時進(jìn)行轉(zhuǎn)染。不同的細(xì)胞轉(zhuǎn)染實驗,對細(xì)胞密度的要求不盡相同。在進(jìn)行不同核酸或不同細(xì)胞系的轉(zhuǎn)染時,需要根據(jù)說明書再次優(yōu)化實驗條件。此外,在實驗過程中保證相同的接種條件,確保實驗數(shù)據(jù)的可重復(fù)性;
4: 質(zhì)粒與轉(zhuǎn)染試劑使用比例:對于大多數(shù)細(xì)胞系,轉(zhuǎn)染復(fù)合物中DNA (μg)與PolyShoote NEO-PEI Transfection Reagent (μL) 的比例在1:1至1:5之間,推薦比例為1:2.5。想要獲得*的轉(zhuǎn)染結(jié)果,需要對這一比例進(jìn)行優(yōu)化,根據(jù)所轉(zhuǎn)染細(xì)胞及質(zhì)粒選擇適合的轉(zhuǎn)染比例;
5: PolyShooter NEO-PEI Transfection Reagent也可用于有血清培養(yǎng)基的轉(zhuǎn)染,但通過我們實驗室的測試,我們認(rèn)為體系中血清的存在會對轉(zhuǎn)染效果有一定程度的干擾,所以,為了追求更高效的轉(zhuǎn)染效率,我們更推薦使用無血清轉(zhuǎn)染法(即“07/實驗步驟"中敘述的轉(zhuǎn)染方法);
6: 由于一些特殊培養(yǎng)基中的某些成分可能會抑制陽離子聚合物介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染,因此有必要檢測特殊培養(yǎng)基與PolyShooter NEO-PEI Transfection Reagent的相容性;
7: 為了您的健康安全,請規(guī)范操作,穿戴實驗服與手套開展實驗;
8: 本產(chǎn)品僅供科研使用,請勿用于臨床診斷及治療。
09/實驗案例分析
1: 轉(zhuǎn)染前一天,將圖2所示3種狀態(tài)良好的細(xì)胞接種于24孔板,使其在轉(zhuǎn)染時密度為60%-70%。
2: 按照每孔計量,取1μg GFP質(zhì)粒加入到1.5 mL離心管中,PolyShooter NEO-PEI組(圖2上)加入2.5 μL PolyShooter NEO-PEI Transfection Reagent與質(zhì)粒混合,PEI組(圖2下)加入2.5 μL PEI 25k與質(zhì)粒混合。室溫孵育3分鐘后,往混合物中加入100 μL無血清基礎(chǔ)DMEM培養(yǎng)基,輕輕混勻,在室溫下靜置30分鐘,形成轉(zhuǎn)染試劑-核酸復(fù)合物。
3: 孵育30分鐘后,往轉(zhuǎn)染試劑-核酸復(fù)合物中加入150 μL無血清基礎(chǔ)DMEM培養(yǎng)基稀釋復(fù)合物。
4: 將細(xì)胞培養(yǎng)基棄去,加入上述250 µL 轉(zhuǎn)染試劑-核酸復(fù)合物。
5: 轉(zhuǎn)染12小時后,給細(xì)胞補(bǔ)充新鮮生長培養(yǎng)基500 µL/孔。
6: 轉(zhuǎn)染細(xì)胞培養(yǎng)48小時后,用熒光顯微鏡檢測GFP綠色熒光蛋白表達(dá)情況,并拍照記錄,實驗結(jié)果如圖2所示。
圖2: 轉(zhuǎn)染細(xì)胞48小時后,用熒光顯微鏡檢測GFP綠色熒光蛋白表達(dá)情況
10/其他相關(guān)產(chǎn)品
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