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免疫組織化學工作流程

更新時間:2023-11-22      點擊次數(shù):316

VECTASTAIN ®  ABC 系統(tǒng)使我們成為免疫組織化學 (IHC) 和免疫細胞化學 (ICC) 領域的先驅,并且我們在這些領域仍然是值得信賴的品牌。我們的產(chǎn)品因其高靈敏度、低背景、可靠性、再現(xiàn)性和價值定價而受到好評。我們提供許多不同的檢測系統(tǒng)來適應廣泛的實驗優(yōu)先事項。

為您的 IHC 檢測選擇合適的試劑是優(yōu)化實驗方案的重要組成部分。 Vector Laboratories 是您 IHC 工作流程每個步驟中優(yōu)質標記和檢測產(chǎn)品的資源。

載玻片準備

· 大化組織切片在載玻片上的保留和粘附。

· 劃分和隔離各個部分以減少試劑使用或進行離散處理。

抗原修復

使用規(guī)定的 pH 值和鹽溶液提高醛固定制劑的組織抗原性(“免疫反應性")。醛固定(例如福爾馬林)和石蠟包埋過程中的熱暴露相結合會使表位難以檢測。在抗原修復過程中,組織會受到緩沖溶液和高溫的組合處理,這會導致蛋白質發(fā)生構象變化,從而暴露抗原以供檢測。

淬火/阻斷

使用封閉溶液減少或消除組織切片和細胞制劑上不需要的背景(非特異性)染色。非特異性染色可能是由內(nèi)源酶或組織成分引起的,包括內(nèi)源酶活性、Fc 受體的存在或檢測試劑與組織或細胞蛋白和其他大分子的相互作用。根據(jù)陰性對照切片的結果選擇封閉溶液。

一抗/凝集素

使用經(jīng)過驗證的特定標記物來識別和定位細胞或組織制劑中的靶蛋白抗原或糖蛋白部分。選擇一抗或凝集素時,請考慮組織種類和組織制備方法(例如固定),以確保與靶標特異性結合。

二抗

選擇高度純化和最佳偶聯(lián)的檢測試劑以滿足檢測條件,例如一抗種類、組織種類、靶標豐度和易用性(濃縮或即用型)。

三級試劑

如果需要,提高檢測的靈敏度,以可視化弱或短暫表達、上調(diào)或未知(例如,基因敲入研究)抗原。

底物/顯色劑

使用酶特異性顯色顯色來可視化您的目標蛋白抗原及其細胞和/或細胞外定位和相對表達水平。選擇符合您顏色偏好且與其他系統(tǒng)試劑兼容的酶底物(例如復染劑、封固劑和其他底物(如果多重檢測))。

復染

使用對比核染色來澄清異質形態(tài)結構內(nèi)的靶抗原信號。這有助于闡明組織中的細胞結構和特定染色模式。選擇與酶底物形成對比且與底物和封固劑化學相容的復染劑(藍色、綠色或紅色)。

蓋玻片/封片

保留目標抗原染色劑以供短期或無限期存儲和存檔。選擇與您的底物和復染劑兼容的封固劑。使用非水封固劑封固要存檔的載玻片,或使用水性封固劑保存長達數(shù)年。


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