生化試劑是指有關(guān)生命科學(xué)研究的生物材料或有機(jī)化合物,以及臨床診斷、醫(yī)學(xué)研究用的試劑。
試劑空白吸光度是反映試劑質(zhì)量的指標(biāo)之一,但不能反映試劑質(zhì)量的全部。試劑成份、純度、用量及穩(wěn)定性,才是保證試劑質(zhì)量的關(guān)鍵所在。
1 ,試劑空白
試劑空白吸光度是反映試劑質(zhì)量的指標(biāo)之一。每種試劑都有一定的空白吸光度范圍,試劑空白吸光度的改變往往提示該試劑的變質(zhì);如利用Trinder反應(yīng)為原理的檢測(cè)試劑會(huì)因含酚類(lèi)物質(zhì)被氧化為醌而變?yōu)榧t色。堿性磷酸酶、r一谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶、淀粉酶等檢測(cè)試劑會(huì)因基質(zhì)分解出硝基酚或酚基苯胺而變黃。有些試劑久置后變渾濁。這些情況均可使空白吸光度升高。原則上,吸光度上升的反應(yīng),其試劑空白吸光度越低越好,不能超過(guò)一個(gè)高限;相反,吸光度下降的反應(yīng),其試劑空白吸光度不能低于一個(gè)低限。
2, 樣品信息
樣品的溶血、脂血、黃疸等會(huì)對(duì)測(cè)定結(jié)果產(chǎn)生非化學(xué)反應(yīng)的干擾。因此,應(yīng)根據(jù)溶血、脂濁、黃疸的光譜吸收特性,采用雙波長(zhǎng)或多波長(zhǎng)的檢測(cè)模式,并在結(jié)果計(jì)算中扣除因溶血、脂血、黃疸引起的影響,減少干擾程度。
3 ,測(cè)定范圍
每種待測(cè)物都有一個(gè)可測(cè)定的濃度或活性范圍,樣品結(jié)果若超過(guò)此范圍,分析儀將顯示結(jié)果超過(guò)范圍的提示。表示試劑已經(jīng)變質(zhì),應(yīng)更換合格試劑。
4 ,底物耗盡
使用連續(xù)監(jiān)測(cè)法、兩點(diǎn)法測(cè)定酶活性時(shí),若酶活性非常高,底物接近被耗盡,吸光度上升或下降會(huì)超過(guò)某一吸光度變化范圍,監(jiān)測(cè)期的吸光度將偏離線性,使測(cè)定結(jié)果不可靠。
5, 酶的預(yù)活化
測(cè)定血清中的某些酶,如CK,離體(采血)后很容易失活。失活的原因是酶活性中心的活性基因巰基(一SH)被氧化造成的。只有通過(guò)適當(dāng)?shù)倪€原作用才能重新激活。如CK—NAC試劑盒即含有CK活化劑,名為N一乙酰半胱氨酸。實(shí)驗(yàn)研究證明,NAC對(duì)血清中已失活的CK活化過(guò)程約需180 S。這就是CK測(cè)定為什么要延遲時(shí)間較長(zhǎng)的理論依據(jù)。在AST,ALT采用IFCC推薦方法測(cè)定時(shí)需要磷酸吡哆醛預(yù)活化。需要強(qiáng)調(diào):含有活化劑的生化試劑,其測(cè)定酶活性的結(jié)果要高些。
6、 校準(zhǔn)與結(jié)果溯源性
酶的校正:要滿(mǎn)足在同一方法學(xué)、同一測(cè)定條件、與理論計(jì)算的FACTOR值差異不大,沒(méi)有發(fā)現(xiàn)有明顯影響因素,方可進(jìn)行校正。
7, 試劑抗干擾作用的合理性
有些液體雙試劑,其實(shí)質(zhì)并不真正具備抗干擾的能力而只是解決了試劑的液體化和穩(wěn)定性問(wèn)題。